无锡数字PCR报价
CNV(Copy Number Variations,拷贝数变异)研究需要极高的定量精度以区别不同拷贝数之间的微小差异,测序方法适用于高于30%的变异率检测,而qPCR的比较**辨在1.5倍左右,数字PCR通过直接计数目标基因与参照基因( 拷贝数为1的基因,例如RNaseP) 的数目,计算比值,直接得到目标基因的拷贝数可以达到极高的拷贝数分辨精度。
除此之外,dPCR在病原微生物检测、microRNA研究、基因表达研究、NGS测序文库的***定量、表观遗传学直接相关的DNA甲基化定量检测、ChIP定量鉴定等领域的应用都令人极为期待,而在转基因成分鉴定、分子标准品精确定量、环境样本检测等具体的应用方向上,已经有大量实验数据和结果证明了dPCR技术的优良性能。
检测灵敏度高达万分之一。无锡数字PCR报价
与常规的PCR的方法相比,dPCR有很好的优势。
***定量
常规PCR和实时荧光PCR定量检测都需要已知拷贝数的标准DNA制定标准曲线,由于样品测定在各种条件上不会完全一致,会造成PCR扩增效率的差异,从而影响定量结果的准确性。而ddPCR不受标准曲线和扩增动力学影响,可以进行***定量。
样品需求量低
在检测珍贵样品和样品核酸存在降解时具有明显的优势。
高灵敏度
ddPCR本质上是将一个传统的PCR反应分成了数万个**的PCR反应,在这些反应中可以精确地检测到很小的目的片段的差异、单拷贝甚至是低浓度混杂样品,且能避免非同源异质双链的形成。
高耐受性
由于目的序列被分配到多个微滴中,***降低了体系间的影响以及背景序列和***物对反应的干扰,扩增基质效应大大减小。 上海永诺数字PCR哪家好动物源性的检测分析。
二代测序辅助建库
目前靶向测序建库方法包括扩增子方法,在均相溶液中,当扩增引物增加时,由于扩增引物之间的相互作用,从而影响扩增的效率;如果将其分散到大量微液滴中扩增,将可降低引物间相互作用,提高扩增效率。同时还可以实现对于少量模板的有效扩增,得到更多的有效测序数据。
CRISPR-Cas9基因编辑结果验证
CRISPR-Cas9技术的发明,是基因编辑技术的一大突破,但如何验证实验是否成功,仍需要高灵敏度的检测方法,数字PCR技术可以满足这一需求。Broad研究所张锋团队发明了以CRISPR为基础的SHERLOCK技术可以对核酸进行高灵敏度的定性检测,但精确定量评估时仍采取了数字PCR进行确认。
要了解为什么传统 PCR 存在限制,务必要了解 PCR 反应过程中发生了什么。基本 PCR 运行可以分为三个阶段:
指数期
每个循环积聚的产物准确加倍(假定 ** 反应效率)。该反应具有高度特异性和精确度。出现指数式扩增,因为所有试剂均新鲜可用,反应的动力学推动反应有利于扩增子加倍。
线性期(高变异性)
随着反应继续,一些试剂因扩增而被消耗。反应开始减缓,并且每个循环的 PCR 产物不再加倍。
平台期(终点:使用传统方法进行凝胶检测)
反应停止,不再产生更多产物,并且如果放置时间够长,PCR 产物将开始降解。因为每个样品具有不同的反应动力学,所以每支试管或每个反应将在不同的时间点进入平台期。在平台期可以看到这些差异。在平台期内,传统 PCR 进行测量,又称为终点检测。 液体活检:早筛、用药、监测、复发。
研究方向
无创产前筛查
无创伤的产前诊断, 如21号染色体为3倍体的唐氏综合征、已知父母基因型的胎儿地贫检测或已知父母基因型的其它核酸病检测(孟德尔相关遗传疾病)。目前标本来源主要为血液,而待检测的胎儿DNA受到母体DNA的干扰,影响了检测的准确性。而QX200检测系统独特的微滴化技术完全可以作为二代测序法的补充来进行的无创伤产前诊断,从而提高工作效率及节约成本。
转基因食品或成分的检测
目前在确定转基因作物或成分的含量时采取定量PCR的标准曲线法,这种方法需要依赖于已知浓度的标准品(Certified Reference Materials Calibrants, CRMCs)。ddPCR***定量的方式可以彻底解决这些标准物质的定标工作。 理论上可覆盖qPCR(荧光定量PCR)的所有应用。常州微流控芯片数字PCR正规代理
MicroDrop™数字PCR平台是由永诺生物自主研发并已投入生产的微滴式数字PCR检测系统。无锡数字PCR报价
MicroDrop-100数字PCR系统具有如下优点:
1、JUE对定量,结果判读不需要依赖标准曲线;
2、突破局限,检测灵敏度可低至万分之一;
3、专利设计的具有高精度复杂三维微纳防污染结构的微流控芯片,单张可同时处理1-8个样本;
4、一键式自动操作,20uL PCR体系可生成100,000微滴,8个样本单次微滴生成*需2分钟;
5、FAM、HEX(VIC)双荧光通道,半导体激光器做为激发光源相比LED光源,稳定性高,功率稳定不影响检测灵敏度,单色性能优异降低对检测特异性的影响,且方向性好;
6、检测器为2个光电倍增管,灵敏度及增益优于MPCC或CCD,普通的硅光子计数器,增益为10^5,光电倍增管增益可以达到10^9;
7、**知识产权的软件系统可直接计算拷贝数、拷贝数浓度,CNV 值,突变丰度;阈值线可自动或手动完成,每个样本可单独设定阈值线;输出数据图标、直方图、一维图、二维图、浓度图、95%置信度不确定性区间等;软件可自动识别复杂微滴分簇四簇;软件具备数据质控功能,支持阳性微滴数、阴性微滴数、总微滴数统计及这些指标的任意组合;单个样本100,000微滴的反应体系以及高灵敏度的检测系统,配以独特的软件系统,可以实现高达20重的PCR分析;
8、单次检测通量96个样本,操作灵活; 无锡数字PCR报价