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    为进一步提高《微生物组实验手册》稿件质量，本项目新增大众评审环节。文章在通过同行评审后，采用公众号推送方式分享全文，任何人均可在线提交修改意见。公众号格式显示略有问题，建议电脑端点击文末阅读原文下载PDF审稿。在线文档(/l/cL8RRqHIL)大众评审页面登记姓名、单位和行号索引的修改建议。修改意见的征集截止时间为推文发布后的72小时，文章将会结合有建设性的修改意见进一步修改后获得DOI在线发表，同时根据贡献程度列为审稿人或致谢。感谢广大同行提出宝贵意见。细胞内融合基因技术(epicPCR)测定功能类群多样性DiversityofFunctionalMicrobesDetectedbyepicPCRTechnology沈文丽1，王尚2*，邓晔2,31山东大学海洋研究院，山东大学，青岛，266237；2中国科学院环境生物技术重点实验室，中国科学院生态环境研究中心，北京，100085；3中国科学院大学资源与环境学院，中国科学院大学，北京，100049*通讯作者邮箱：shangwang@rcees.摘要：细胞内融合基因技术是一项结合了单细胞分离、融合PCR、巢式PCR和测序技术的新型分子技术，不*可以在未培养的单细胞中将功能基因与系统发育标记基因(如16SrRNA基因)连接在一起，而且通量高，成本低。系统分析与设计通过网络对保险箱的用柜过程及对保险箱的控制可视化。镇江定位监控箱

    将PCR法与细胞培养法结合的整合集成ICC-PCR技术的出现克服了两者各自的缺点，如PCR法只能对病毒的核酸物质进行检测，而不能区分是否具有***性，细胞培养法耗时长等问题。ICC-PCR法可快速地对微量且具有***性的病毒进行检测，Vero细胞和MA-104细胞是ICC-PCR常用的培养细胞，但细胞趋性限制了ICC-PCR可检测到的病毒种类和类型的范围（Haramotoetal.,2018）。目前，RT-PCR是用于病毒检测的**常用的方法之一，尽管其不能反应病毒是否具有***性，但能够检测环境样品中微量存在的病毒，也能够对无法培养的病毒进行检测，对预警环境中如大气和水源等病毒安全性具有重要意义。06随机扩增多态性DNA（RAPD）法在常规PCR技术的基础上，Williams（1990）建立了一种简便、灵敏的遗传标记新技术，即随机扩增多态性DNA（RAPD）。该技术利用人工合成的一系列单链寡聚脱氧核苷酸引物（通常10个碱基长度）扩增基因组DNA模板，扩增的PCR片段经聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳分离来检测扩增产物DN**段的多态性。分析时，对某一特定的寡核苷酸引物来说，其可检测的DNA基因组多态性区域是有限的，但同时使用多条引物进行反应则可覆盖几乎整个DNA基因组。因此。带gps便携式保险箱原理锁定时，活动挡板与本物流保险箱前端面齐平。

    出场编号：A08236102X）、紫外可见分光光度计（编号：HLJC/ZX03-2016）仪器设备档案中缺少仪器操作规程、期间核查规程和记录等信息。嘉兴安联检测技术服务有限公司1、资质认定证书附表中，土壤pH值项目已有行标（HJ962-2018），未变更。2、未将《检验检测机构资质认定生态环境监测机构评审补充要求》中第五条、第七条、第十五条等内容纳入机构体系文件。3、不能提供ZR-3260型自动烟尘烟气综合测试仪（出场编号：3360A17060689）二氧化氮、一氧化碳传感器的计量溯源记录；不能提供YQ025溶解氧仪（编号：2017033）期间核查记录。4、标准物质清单无表头、未受控，未将基准试剂重铬酸钾、二氧化硫、一氧化碳等标准气体、土壤标准物质纳入清单。5、编号2019-H-018检测报告所附氨氮原始记录中缺少标准溶液的溯源记录；编号2019-H-042检测报告所附大气环境采样原始记录中缺少大气采样仪的流量校准记录；2019-H-151检测报告所附2019年6月12日-6月13日自动烟尘（气）采样仪记录表（1）中打印条上的仪器编号为3260A17060689、仪器编号为3260A17050553，所附自动烟尘（气）采样仪记录表（1）中仪器编号皆为2017156，上述二台仪器使用记录中无2019年6月13日的使用记录。

    确保生产和贮存的产品质量以及相关设备性能不会直接或间接地受到影响。2)GMP第65条必要时，应当设置专门的仪器室，使灵敏度高的仪器免受静电、震动、潮湿或其他外界因素的干扰。3)GMP第223条物料和不同生产阶段产品的检验应当至少符合以下要求：（六）检验记录应当至少包括以下内容：6.检验过程，包括对照品溶液的配制、各项具体的检验操作、必要的环境温湿度。2、药典的相关要求（以《中国药典》为例）：1)《凡例》十五、溶解度试验法：除另有规定外，称取研成细粉的供试品或量取液体供试品，于25℃±2℃—定容量的溶剂中，每隔5分钟强力振摇30秒钟；观察30分钟内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒或液滴时，即视为完全溶解。2)《凡例》二十一、贮藏项下的规定，系为避免污染和降解而对药品贮存与保管的基本要求，以下列名词术语表示：阴凉处系指不超过20℃凉暗处系指避光并不超过20℃冷处系指2～10℃常温系指10～30℃除另有规定外，贮藏项下未规定贮藏温度的一般系指常温。3)《凡例》二十九（3）有关的温度描述，一般以下列名词术语表示：水浴温度除另有规定外，均指98～100℃热水系指70～80℃微温或温水系指40～50℃室温。比如 , 对保险箱周围环境的监控 , 当保险箱位置发生变化时可以及时发现 。

    5'-GATATTTGIGGIGTTCAGCCIATGA-3')和MZIA6(5'-CGCGGTTGATTTCCAGCATGATTTC-3')(Filée等，2005)扩增g23基因片段。四、PCR扩增体系及步骤PCR反应体系按照50μl为例：Ex-TaqBuffer5μldNTP(mM)5μlPrimerF(10mM)2μlPrimerR(10mM)2μl模板DNA(100ng/μl)2μlEx-Taqpolymerse(TaKaRa)DNA聚合酶1μl无菌水33μlPCR反应程序(35循环)：Step1:94°C5min预变性Step2:94°C1min变性Step3:55°C1min退火Step4:72°C1min延伸Step5:gotoSteps2~435个循环循环扩增Step6:72°C10min充分延伸五、PCR产物纯化利用，参照DNAMarker条带的分子量大小，初步判断扩增条带是否是g23基因片段。根据笔者经验，不同环境样本中g23基因片段大小在350~600bp之间。将目的片段位置合格的样本，用无菌手术刀切取目的条带，参照胶回收试剂盒的操作说明进行基因片段的纯化，用NanoDrop2000测定产物浓度后，进行下游实验。六、克隆、变形梯度凝胶电泳(DGGE)及测序将纯化后的产物连接到质粒pMD18-T(TaKaRa，Dalian，China)上，导入大肠杆菌EscherichiacoliDH5α感受态细胞中，将阳性克隆PCR扩增后，通过DGGE筛选单一条带的方法，去掉重复序列，将单一的克隆产物进行Sanger测序分析。。塑造了独树一帜的RTP设计理念。北京智能保温箱

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    其中Devex（得维克）气体采样袋是铝箔膜气袋，其余四类是氟聚合物薄膜气袋。通常环境监测挥发性有机物的采样应优先选用氟聚合物薄膜气袋。（本段引自《挥发性有机物监测技术》，孙也编著）罐采样罐采样指的是通过罐内负压自动采集现场空气的采样方式，其特点和优点是能够完全还原现场空气状况。使用罐采样的基本步骤是：使用前，使用罐清洗装置对采样罐进行清洗；清洗完毕后，将采样罐抽至真空（＜10Pa）待用；使用时，采用瞬时采样或者恒定流量采样方式对样品进行采集。《HJ759-2015环境空气挥发性有机物的测定罐采样/气相色谱-质谱法》中规定了罐采样的一些基本步骤：采样之后，可以将采样罐直接接入热解吸/热脱附装置进行分析（需要设备支持），不同厂家与采样罐连接的设备结构和名称略有不同，一些厂家通过采样罐-气罐自动进样器-热解吸装置的搭配与气相色谱连接进行分析，一些厂家通过采样罐-气体冷阱浓缩仪/大气预浓缩装置的搭配与气相色谱连接进行分析。无论何种名称，其基本原理与热解吸/热脱附原理息息相关。下图为典型的罐采样-热脱附-气相色谱仪的装置示意图：市面上常用的采样罐，通常叫做苏玛（Summa）罐。Summa罐的罐体主要有抛光处理和硅烷化两种。镇江定位监控箱