黑龙江MEM培养基常见问题

    生产上一般采用冷水喷淋冷却，冷却到40-50℃后，输送到预先已经**过的罐内。（四）、间歇**与连续**的比较1、歇**的***和缺点***是设备要求低，不需另外设置加热、冷却装置；操作要求低，适于手动操作，适合于小批量生产规模；适合于含有大量固体物质的培养基的**。缺点是培养基的营养物质损失较多，**后培养基的质量下降；需进行反复的加热和冷却，能耗较高；不适合于大规模生产过程的**；发酵罐的利用率较低。2、连续**的***和缺点***是**温度高，可减少培养基中营养物质的损失；操作条件恒定，**质量稳定；易于实现管道化和自控操作；避免了复的加热和冷却，提高了热的利用率；发酵设备利用率高。缺点是对设备的要求高，需另外设置加热、冷却装置；操作较麻烦；染菌的机会较多；不适合于含大量固体物料的**；对蒸汽的要求高。由此可见，无论在理论上或者在实践上，与间歇**过程相比，连续**的***十分明显。因此，连续**越来越多地被用培养基的**。无酚红培养基避免了酚红对细胞的潜在毒性作用。黑龙江MEM培养基常见问题

    如何正确地使用培养基及**大程度地保持培养基的营养以维持细胞的生长，对每个培养者都很重要。培养基的使用依不同的培养基种类、培养方式、细胞种类的不同而存在差异。细胞培养液的构成细胞培养液指细胞生长的液体环境，一般指完全培养液，添加了血清、水解乳蛋白、各种添加剂等可以直接使用的培养液。细胞培养基&血清模式血清对于在传统培养基配方中生长和增殖的大多数细胞系来说是需要的，因为大多数单独的培养基并不能提供细胞生长所需要的全部营养，如MEM培养基，较为常用的量为5％～10％的比例，而特殊的低血清培养基血清量可降至3％左右，细胞的形态和功能不受影响。细胞培养基&乳欧液模式化学合成培养基现虽已大规模使用，但在某些培养领域水解乳蛋白仍在使用，以补充培养液中缺乏的氨基酸、小肽物质。较为常用的方式是用汉氏（Hanks’BSS）或欧式(Earle’sBSS)平衡液溶解水解乳蛋白（一般为5‰浓度），即成乳汉（欧）液，再与化学合成培养基（一般为MEM）按比例混合使用（如1：1）。细胞培养基&各类添加剂（生长因子等）模式成分复杂的培养基还含有许多化合物，包括蛋白质、多肽、核苷、柠檬酸循环的中间产物、**酸及脂类等。吉林培养基常用知识F12培养基能够支持细胞的持续分裂。

    一）、实验室种子培养基**方法1、高压蒸汽**锅、手提式**锅。容量小。2、立式或卧式**锅。容量较大，一般能装几十瓶或几百瓶。3、**柜。要和蒸汽锅炉配套，用于大量种瓶培养基的**，一次能装几百至几千瓶(袋)。（二）、培养基的分批**1、定义：将配制好的培养基输入发酵罐中，用蒸汽加热，使培养基和设备同时**的一种**方式，又称实罐**。2、**过程过程包括升温、保温和冷却等三个阶段，各阶段对**的贡献：20%、75%、5%。培养基的升温可由两种方式实现：间接加热，在夹套或蛇管中通入蒸汽加热；直接加热，在培养基中直接通入热蒸汽加热。**过程中加热和保温阶段的**作用是主要的，而冷却阶段的**作用是次要的，一般很小，可以忽略不计。此外，还应指出的是，应当避免长时间的加热阶段，因为加热时间过长，不仅破坏营养物质，而且也有可能引起培养液中某些有害物质的生成，从而影响培养过程的顺利进行。在实际生产中，也可能遇到所供蒸汽不足、温度不够高的情况，这时可以适当延长**时间。生产上甚至有用100℃蒸煮而达到彻底**的实例。如要做固体曲而没有高温蒸汽时，可将原料用100蒸汽蒸30min，杀死其中的营养细胞，但孢子与**的芽孢没有被杀死。

    在工作台上把已经冲洗干净的外植体浸入75％酒精中消毒30s，用无菌水冲洗3～4次，使用白猫漂白水和无菌水按1：4的体积比配制消毒液，将外植体放入消毒液浸泡40min。通过采用上述技术方案，这种方式对外植体消毒方法简单，能够**降低外植体的死亡率，消毒成活率较高。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在s1中，外植体选择为**绣球的枝芽饱满的半木质化枝条茎尖部分。综上所述，本发明包括以下至少一种有益技术效果：本发明通过液体**培养技术，以芽为原材料，获取方便，增殖倍率高达8～10倍，生根率达到95％以上，苗木规格整齐，性状保持稳定，同时节省成本，适合工厂化大规模生产质量绣球种苗。附图说明图1是绣球的液体培养基组培快繁方法的流程示意图。具体实施方式以下结合附图对本发明作进一步详细说明。实施例：参照图1，为本发明公开的一种绣球的液体培养基组培快繁方法，具体步骤如下：(一)、试验材料：供试材料采自江苏东郁植物科技有限公司苗圃的**绣球，品种为无尽夏(endlesssummer“bloomstruck”)，外植体选用当年生枝芽饱满的半木质化枝条茎尖部分。(二)、试验方法：绣球**培养过程按以下步骤进行：初代培养、继代培养、生根培养。。MEM培养基在细胞实验中表现出高效的稳定性。

    由于培养基的间歇**不需要专门的**设备，投资少，对设备要求简单，对蒸汽的要求也比较低，且**效果可靠，因此，间歇**是中小型生产工厂经常采用的一种培养基**方法。（三）、培养基的连续**1、定义：连续**也叫连消，将配制好的并经预热（60～75℃）的培养基用泵连续输入由直接蒸汽加热的加热塔，使在短时间内达到**温度（126～132℃）。然后进入维持罐（或维持管），使在**温度下维持3～7分钟后再进入冷却管，使其冷却至接种温度并直接进入已事先**（空罐**）过的发酵罐内。其温度一般以126～132℃为宜，总蒸汽压力要求达到～MPa以上。培养基采用连续**时，需在培养基进入发酵罐前，直接用蒸汽进行空罐**（空消），用无菌空气保压，待培养基流入罐后，开始冷却。**时对培养基的加热可采用各种加热器。培养基的冷却方式有喷淋冷却式、真空冷却式、薄板换热器式几种方式，其过程均包括加热、维持和冷却阶段。2、连续**的流程：（1）由热交换器组成的**系统流程中采用了薄板换热器作为培养液的加热和冷却器，蒸汽在薄板换热器的加热段使培养液的温度升高，经维持段保温一定时间后，培养基在薄板换热器的冷却段进行冷却。MEM培养基常用于多种哺乳动物细胞的体外培养。吉林培养基常用知识

无酚红培养基适用于对酚红敏感的实验。黑龙江MEM培养基常见问题

    体外培养时，一定的浓度范围条件下，葡萄糖主要经糖酵解循环转化成乳酸来为细胞提供能量。（氨基酸）氨基酸在细胞内的重要生理作用主要体现在以下几个方面：①是蛋白质的基本组成单位，用于合成蛋白质和多肽；②可用于合成某些具有重要生理作用的含氮化合物，如核酸、尼克酰胺等；③某些氨基酸还具有独特的生理作用，如甘氨酸参与生物转化作用，丙氨酸和谷氨酰胺参与细胞内氨的运输等；④可转变成糖类和脂肪，参与氧化供能。细胞所能利用的氨基酸是L型同分异构体，D型氨基酸不能被利用。不同的细胞对氨基酸的需求各异，但有些必需氨基酸是细胞不能自身合成的，必须依靠外源的细胞培养液提供。其余非必需氨基酸，细胞可以自己合成，或通过转氨作用由其他物质转化而来，但是在细胞培养基中添加适当浓度的非必需氨基酸可以减轻细胞在合成方面的负担，提高谷氨酰胺及其它必需氨基酸的利用率。绝大部分细胞对谷氨酰胺有较高的要求，可能因其不仅是细胞的主要氮源，且可作为细胞生长的能源物质和嘌呤、嘧啶核苷酸的前体，另外还可直接作为细胞增殖和产物合成中的蛋白质和多肽的组成成分。在缺少谷氨酰胺时，细胞会生长不良，甚至死亡。由于谷氨酰胺具有多种生理作用。黑龙江MEM培养基常见问题