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随着大气污染、吸烟、工业经济发展导致的理化因子增多以及人口年龄老化等因素,呼吸系统疾病近年来有明显增长的趋势。由于呼吸疾病涉及的较多,包括气管、支气管及肺部等,单以肺部为例,所涉疾病就包括肺阻塞、肺纤维化、肺气肿、等,下面,武汉云克隆将以大鼠/小鼠为模式动物,介绍几种常见的肺部疾病动物模型。4.特发性肺纤维化特发性肺纤维化(Idiopathicpulmonaryfibrosis,IPF)为不明原因引起的成人慢性、进展性、纤维化性间质性肺炎。4.1建模方法:SPF级C57/BL6雌性小鼠,体重约18~20g。使用气管滴注博来霉素法建模。小鼠疾病模型研究也是人相关疾病药物研发的起点。无锡疾病动物模型建模购买
pirb的功能和下游抑制性信号通路仍然未被阐明,因此迫切需要pirb的细胞和动物模型。目前对于pirb基因功能的研究,多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide,pep)和抑制剂,或者采用慢病毒转染。前者受到是否能够透过血脑屏障和抑制剂效率的影响,后者慢病毒转染在原代细胞和在体的转染效率比较低,使研究pirb的功能受到极大的限制。为解决这些问题,我们通过crispr/cas9技术建立了pirb基因敲入小鼠,将pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位点,为研究pirb在免疫系统或者神经系统的作用和机制提供了很好的工具。技术实现要素:本发明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠动物模型。大鼠疾病动物模型建模供应商收集研究疾病的生物学信息资料。
即为本发明构建的一种pirb基因敲入的小鼠动物模型。本发明所采用第二种技术方案的特点还在于,步骤1中得到grna1和grna2后分别与trancrrna在25℃孵育10min形成二级结构。步骤3中grna1、grna2的浓度均为2~10pmol/ul,cas9蛋白的注射浓度为30~100ng/μl。步骤4中southern杂交采用bamhi和avrii核酸内切酶切割f1代杂合子小鼠的dna。本发明的有益效果是:本发明提供了pirb基因敲入的小鼠动物模型及其构建方法,本发明的小鼠动物模型对于pirb基因功能的研究和在体验证提供了良好的基础。分离自pirb基因敲入小鼠的细胞还可以用于研究pirb发挥调节作用的下游机制。通过pirb敲入动物模型与不同类型cre小鼠的杂交,可以用于研究ad不同***或不同细胞类型pirb的调节作用。附图说明图1为本发明pirb基因敲入的小鼠插入pirb基因cds和loxp位点的打靶质粒载体的构建图;图2为本发明pirb基因敲入的小鼠模型的构建方法的流程图;图3为本发明f1代pirb敲入的小鼠的基因型pcr结果鉴定电泳图;图4为本发明f1代pirb敲入的小鼠验证pirb基因敲入效果的测序峰图;图5为本发明f1代pirb基因敲入的小鼠进行southern鉴定的方法示意图;图6为本发明f1代pirb基因敲入的小鼠进行southern鉴定的结果图。
大鼠卵巢重量统计示意图。图6:动情周期检测(光镜下10倍)示意图,其中,a、b、c、d依次为:动情前期,动情期,动情后期,动情间期。图7:he染色观察不同方法造模对卵泡形态的影响(光镜下10倍)示意图,其中,a、b、c、d依次为:空白组,2mg组,4mg组,6mg组。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明。然而,本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解,在不背离本发明的精神和范围的前提下。进一步地,压迫元件采用不受磁场干扰、置入体内不会对神经造成化学刺激以及具有一定可塑性的材料制备而成。疾病动物模型建模有加些方式?
该模型能够帮助我们研究pirb基因在免疫系统和神经系统的功能以及下游的调节机制。本发明的另一目的在于提供上述小鼠动物模型的构建方法。本发明所采用的第一种技术方案是:pirb基因敲入的小鼠动物模型,包括确定pirb基因的待敲入的特异性靶位点grna1和grna2,将pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的内含子1内,所述grna1的基因序列如seqid**所示,grna2的基因序列如。本发明所采用的第二种技术方案为:pirb基因敲入的小鼠动物模型的构建方法,具体按照以下步骤实施:步骤1、基于crispr/cas9技术构建针对c57bl/6j小鼠rosa26基因的特异性grna1和grna2,grna1的基因序列如seqid**所示,grna2的基因序列如;步骤2、构建“cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya”基因盒打靶载体,将打靶载体进行线性化处理;步骤3、步骤2中将含有loxp位点打靶载体、步骤1中有活性的grna1和grna2与cas9蛋白共同注射进入**小鼠受精卵中,获得f0代小鼠;步骤4、将步骤3中性成熟的阳性f0小鼠分别与野生型鼠交配繁一代,获得f1代杂合子小鼠,通过pcr、测序和southern杂交确定动物基因型;步骤5、将步骤4获得的f1代杂合子小鼠近交获得f2代纯合子小鼠。人类疾病的动物模型是指各种医学科学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物。宿迁疾病动物模型建模
验性动物模型是指研究者通过使用物理的、化学的和生物的致病因素作用于动物。无锡疾病动物模型建模购买
可比性一般疾病多为零散发生,在同一时期内,很难获得一定数量的定性材料,而模型动物不仅在群体数量上容易得到满足,而且可以在方法学上严格控制实验条件,在对饲养条件及遗传、微生物、营养等因素严格控制的情况下,通过物理、化学或生物因素的作用,限制实验的可变因子,并排除研究过程中其它因素的影响,取得条件一致的、数量较大的模型材料,从而提高实验结果的可比性和重复性,使所得到的成果更准确更深入。折叠意义4有助于认识疾病的本质在临床上研究疾病的本质难免带有一定局限性。无锡疾病动物模型建模购买
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